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 系統適用性試驗用色譜儀分離相同體積(可達25μl)的標準液的5個進樣，并按檢測步驟測定峰響應值。按公式100×(標準偏差/平均峰響應值)計算峰響應值的相對標準偏差，不得超過2%。用相同方式注射25μ1體積的系統適用性溶液。按色譜儀通用試驗用于R的公式計算甲酰四氫葉酸鈣和葉酸之間的分辨率系數，不得小于3.6(用特殊的柱時，減少流動相中的甲醇量可提高分辨率)。測定步驟用適當的進樣閥或高壓微型注射器，將相等體積(25#1以下)的試樣液和標準液導入色譜儀，測定兩溶液所得主峰的響應值。按下式計算試樣中的葉酸(C19H19N7O6)含量(mg)。葉酸含量/mg=Vc×(Pu/Ps)式中V——試樣液體積，ml；c——標準溶液中藥典級標準葉酸的濃度，mg/ml；Pu和Ps——分別為試樣液和標準Chemicalbook液的主峰響應值。毒性LD50500mg/kg(大鼠，注射)。可安全用于食品(FDA，§172．345，2000)使用限量GB14880-94；嬰幼兒配方食品380～700μg/kg；孕婦、授乳婦專用食品2000～4000μg/kg。GB2760—2002：孕婦、母乳專用食品0.002～O．0075g／kg；固體飲料0.6～1.35mg／kg；免淘洗大米、面粉1000～3000μg/kg；孕婦及乳母專用奶粉740μg/100g(標簽應標明使用量為54g/d)；含乳固體飲料0.23～0.38mg/100g；即食早餐谷類食品1000～2500μg/kg；果凍50～100μg/kg；可可粉及其他口味營養型固體飲料，3000～6000μg/kg(相應營養型乳飲料按稀釋倍數降低使用量)。